干货分享|从大脑中提取脂质的原理和方法

时间:2023-11-21 10:35:53  热度:0°C

大脑脂质提取是指从动物的脑***中提取脂质混合物。研究发现,这种脑脂质提取物含有一种长链多不饱和脂肪酸(PUFAs)的混合物,这种混合物有四个或更多的双键,与人类母***中发现的多不饱和脂肪酸的混合物非常相似。PUFAs的混合物通常包括花生四烯酸(ARA)、二十二碳六烯酸(DHA)和十二碳四烯酸(DTA)。这些多不饱和脂肪酸是人类婴儿正常发育所必需的重要结构脂质。

大脑中脂质提取的原理:

大脑中的脂质通常是通过***仿和甲醇的混合物提取的,其方法是Folch和其同事最初描述的一种方法的改良版本。在大多数处理过程中,***或匀浆都要用19倍体积的2:1(v/v)的***仿-甲醇混合物进行处理。形成了一个单一的液相,留下了一个大分子物质的残留物,主要是蛋白质,含有少量的DNA、RNA和多糖。随后在***仿-甲醇提取物中加入少量水,分离成富含***仿和甲醇的水相;较低的***仿相含有脂质,而低分子量代谢物和极性脂类,如神经节苷脂,处于上层相中。如果较低的相蒸发到干燥,并在***仿等脂质溶剂中重新吸收,蛋白质脂质蛋白仍然不溶解,此时可以去除。神经节苷脂可以通过重新分配到非极性溶剂中从水相中提取。酸性***脂如聚***肌醇在中性pH下提取较差,因此有必要酸化初始***仿-甲醇混合物以回收。以硅酸为固定相,通过薄层色谱(TLC)、离子交换色谱或高效液相色谱(HPLC)从脂质提取物中分离出脂类。

材料:

脑***样本

***仿,甲醇,0/9%***化钠溶液

摇***,漏斗,滤纸,离心机,涡旋机

步骤:

目前最流行的提取方法是Folch法

1/ 将100克新鲜脑***切碎并匀浆。用***仿/甲醇(2/1)将***均浆化,最终体积为***样本体积的20倍(在20毫升溶剂混合物中含有1 g脑***匀浆)

2/混匀后,整个混合物在室温下振动搅拌15-20 min。

3/ 匀浆过滤(用折叠滤纸漏斗),或离心恢复液相。

4/ 用0/2倍体积的水或更优的0/9%***化钠溶液洗涤溶剂。

5/ 在涡旋几秒钟后,将混合物以低速(2000 rpm)离心,以分离两相。

6/通过虹吸去除上层相,并保留它以分析神经节苷脂或小的有机极性分子。如有必要,用甲醇/水(1/1)冲洗界面一次或两次,不要混合整个溶液。

7/ 在上层相离心和虹吸后,含有脂质的下层***仿相在旋转蒸发器中的真空下蒸发,如果体积小于2-3 ml,则在氮气流下蒸发。

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